HRP fermento tiekėjas ELISA: proceso vadovas

HRP fermentas ELISA dažniausiai tvarkomas buferinėse vandeninėse sistemose, tačiau geriausios sąlygos priklauso nuo konjugavimo kelio ir substrato chemijos. Daugelis antikūno-HRP konjugacijų kuriamos esant pH 6.5 to 8.0, o tyrimo inkubacijos buferiai dažnai veikia ties pH 7.2 to 7.6. Dengimo ir blokavimo etapai gali naudoti platesnius intervalus, paprastai pH 7.0 to 9.6, priklausomai nuo antigeno stabilumo ir prisijungimo prie plokštelės. Kūrimas su TMB dažnai vykdomas kambario temperatūroje, apie 20 to 25 °C, o sustabdymo laikas valdomas pagal absorbcijos tikslus. HRP atsarginiai tirpalai turi būti apsaugoti nuo mikrobinės taršos, pakartotinių užšaldymo-atšildymo ciklų, perteklinio peroksido ir aukštos temperatūros. Pilotinio validavimo metu išbandykite kelis fermento ir antikūno santykius, darbinio konjugato skiedimus ir substrato vystymo langus. Praktinis dozavimo intervalas nustatomas pagal atsako kreivę, o ne vien pagal fermento masę.

Tipinis tyrimo buferio pH: 7.2 to 7.6. • Įprasta TMB kūrimo temperatūra: 20 to 25 °C. • Tikrinkite konjugato skiedimą, inkubacijos laiką ir sustabdymo laiką. • Sekite peroksido poveikį ir užšaldymo-atšildymo istoriją.

Vertinant HRP fermento tiekėją imunologinių tyrimų gamybai, pirkimo, MTEP, kokybės ir gamybos komandos turėtų naudoti bendrą kvalifikavimo kontrolinį sąrašą. Pradėkite nuo mėginių bandymų, tada pereikite prie pilotinių partijų, dokumentuotos veikimo peržiūros ir komercinio tiekimo planavimo. Paklauskite, kaip matuojamas aktyvumas, kaip partijos maišomos arba išleidžiamos, kokie naudojami pakartotinio tikrinimo intervalai ir ar tiekėjas gali palaikyti prognozuojamą kiekį. ELISA fermentų tiekėjui imunologiniams tyrimams stipriausias įrodymas yra pakartojamas veikimas pirkėjo pačioje tyrimo sistemoje. Tiekėjo klausimynas gali apimti vietos kontrolę, alergenų arba gyvūninės kilmės kilmės pareiškimus, jei aktualu, taršos prevenciją, pakuočių dydžius, temperatūros kontrolę gabenimo metu ir nukrypimų valdymą. Venkite manyti, kad bendros laboratorinės klasės produktas tinka diagnostinei gamybai. Kvalifikavimas taip pat turėtų apimti atsako laiką, techninę kompetenciją, pristatymo terminus, minimalius užsakymo kiekius ir galimybę rezervuoti arba pakartoti tinkamas partijas.

Naudokite mėginius, pilotines partijas ir komercines partijas kaip atskirus etapus. • Vertinkite techninę pagalbą taip pat kaip kainą. • Patikrinkite pakuočių dydžius, pristatymo terminus ir šaltosios grandinės poreikius. • Dokumentuokite tiekėjo patvirtinimo sprendimus.

HRP ir šarminė fosfatazė yra abu nusistovėję ELISA fermentai, o geriausias pasirinkimas priklauso nuo tyrimo dizaino. HRP dažnai pasirenkama, kai pageidaujamas greitas spalvos vystymasis, didelis jautrumas ir įprasti TMB darbo srautai. Šarminės fosfatazės diagnostinės sistemos gali būti naudingos, kai pageidaujamas ilgesnis signalo vystymasis arba specifinis substrato suderinamumas. Pirkėjai turėtų vengti platformos sprendimo priimti vien pagal fermento aktyvumo skaičius, nes substratai, blokatoriai, matricos, inkubacijos laikai ir skaitytuvo nustatymai keičia galutinį veikimą. Jei jūsų portfelyje yra keli formatai, kvalifikuokite ir HRP, ir šarminę fosfatazę pagal tą pačią valdymo procedūrą. ELISA fermentų tiekėjas diagnostikai turėtų gebėti aptarti klasės pasirinkimą, dokumentaciją, laikymą ir pilotinį validavimą nepervertindamas klinikinio veikimo. Galutiniai tyrimo teiginiai ir priėmimo ribos turi būti nustatyti diagnostikos gamintojo pagal jo kokybės sistemą ir numatytą naudojimą.

Rinkitės HRP greitiems, įprastiems TMB pagrįstiems darbo srautams. • Apsvarstykite šarminę fosfatazę, kai tyrimo kinetika atitinka dizainą. • Lyginkite fermentus realioje plokštelės, buferio ir substrato sistemoje. • Neperkelkite žalių aktyvumo duomenų tiesiogiai į diagnostinį veikimą.

Prašykite COA, TDS, SDS, aktyvumo metodo, laikymo rekomendacijos, partijos dydžio, pakartotinio tikrinimo datos, mėginių prieinamumo ir pakeitimų pranešimo politikos. Taip pat paprašykite pakankamo kiekio funkciniam palyginimui jūsų ELISA formate. Tiekėjas turėtų paaiškinti tvarkymo ribas, pakuotės parinktis, pristatymo terminus ir ar būsimos partijos gali būti sujungtos arba rezervuotos gamybos tęstinumui.

Kvalifikuokite tiekėją etapiniu testavimu: stendo mėginiai, pilotinis konjugavimas, pilotinės ELISA partijos, stabilumo vertinimas ir įeinančios QC peržiūra. Įtraukite pirkimo ir kokybės komandas anksti, kad dokumentacija, atsekamumas, pakeitimų kontrolė ir tiekimo pajėgumas būtų vertinami kartu su tyrimo veikimu. Galutinis patvirtinimas turėtų būti pagrįstas jūsų patvirtintais priėmimo kriterijais, o ne vien fermento aktyvumu.

Daugelyje HRP pagrįstų ELISA darbo srautų inkubacijos buferiai naudojami ties pH 7.2 to 7.6, o spalvos vystymas vyksta apie 20 to 25 °C. Konjugavimo patikra dažnai pradedama ties pH 6.5 to 8.0, priklausomai nuo chemijos ir antikūno stabilumo. Šie intervalai yra atspirties taškai; kiekvienas gamintojas turėtų optimizuoti pagal substratą, matricą, blokatorių ir reikalaujamą galiojimo laiką.

Taip, jei tiekėjas gali pateikti tinkamas klases, stabilų partijos ir partijos nuoseklumą, dokumentaciją ir techninę pagalbą kiekvienai programai. ELISA fermentų tiekėjas imunologinių tyrimų MTEP gali būti ir ELISA fermentų tiekėjas diagnostikai, tačiau diagnostinei gamybai paprastai reikia griežtesnės tiekėjo kontrolės, apibrėžtos įeinančios QC, pakeitimų pranešimo ir patvirtintų pilotinių partijų prieš komercinį naudojimą.

ELISA yra fermentu susietas imunosorbentinis tyrimas, kuriame naudojami fermentai, tokie kaip HRP arba šarminė fosfatazė, kad po antigeno ir antikūno prisijungimo būtų generuojamas išmatuojamas signalas. Tai skiriasi nuo radioimuninio tyrimo ar kitų radio diagnostikos metodų, kuriuose naudojami radioaktyvūs žymenys. Lygindami metodus, pramonės pirkėjai turėtų sutelkti dėmesį į tyrimo formatą, aptikimo chemiją, saugos tvarkymą, dokumentaciją, našumą ir validavimo reikalavimus.